পিসিআর প্যাকেজিং টিপস: আরও দক্ষ পরীক্ষার জন্য সমালোচনামূলক বিশদ

পিসিআর (পলিমারেজ চেইন প্রতিক্রিয়া) পরীক্ষায়, প্যাকেজিং সহজ বলে মনে হতে পারে তবে এটি সরাসরি রিএজেন্ট স্থায়িত্ব, ব্যবহারের সহজতা এবং নির্ভরযোগ্য ফলাফলকে প্রভাবিত করে। ল্যাব সংরক্ষণ এবং পরিবহন করা হোক না কেন - প্রস্তুত রিএজেন্টস বা বাণিজ্যিক প্রিমিক্স, যথাযথ পিসিআর প্যাকেজিং কৌশলগুলি আয়ত্ত করা সাধারণ ত্রুটিগুলি এড়াতে পারে এবং পরীক্ষামূলক দক্ষতা উন্নত করতে পারে। নীচে, আমরা উপাদান নির্বাচন, প্যাকেজিং কৌশল এবং স্টোরেজ বিশদ সম্পর্কিত ব্যবহারিক টিপস ভাগ করি।

I. প্যাকেজিং উপাদান নির্বাচন: সামঞ্জস্যতা এবং সুরক্ষাকে অগ্রাধিকার দেওয়া

পিসিআর প্রতিক্রিয়াগুলি তাপমাত্রা, হালকা এবং দূষকগুলির প্রতি সংবেদনশীল, সুতরাং প্যাকেজিং উপকরণগুলি অবশ্যই তিনটি মূল প্রয়োজনীয়তা পূরণ করতে হবে: বায়ুচালিততা, হালকা - প্রুফিং এবং রাসায়নিক জড়তা।

সেন্ট্রিফিউজ টিউবস এবং পিসিআর প্লেটগুলির জন্য, পলিপ্রোপিলিন (পিপি) এর উচ্চ স্বচ্ছতার কারণে এবং ডিএনএএস/আরএনএএস - ফ্রি বৈশিষ্ট্যগুলির কারণে পছন্দ করা হয় . 0.2 এমএল পাতলা -}}}}}}}}}} goaled rad regads এর জন্য আদর্শ, যখন ০.৫ এমএল টিউবিএসের জন্য আদর্শ হয়, যখন ০.৫ এমএল টিউবস হয়। 96 - ওয়েল পিসিআর প্লেটের জন্য, আমরা একটি স্কার্টড ডিজাইন (রোবোটিক ম্যানিপুলেশনের স্বাচ্ছন্দ্যের জন্য) বা একটি স্ক্রিন্টেড ডিজাইন (স্থান সংরক্ষণের জন্য) বেছে নেওয়ার পরামর্শ দিই।

সিলিং পদ্ধতি: প্রচলিত সেন্ট্রিফিউজ টিউবগুলি ফ্ল্যাট বা উত্থিত ক্যাপগুলি ব্যবহার করে (বাষ্পীভবন এবং শুকনো রোধ করতে)। তবে, দীর্ঘ - টার্ম স্টোরেজের জন্য, তাপ - সিলিং ফিল্ম (যেমন প্যারাফিল্ম) বা শ্বাস -প্রশ্বাসের ফিল্ম (যেমন অ্যারেসিয়াল) অভ্যন্তরীণ এবং বাহ্যিক চাপের ভারসাম্য বজায় রাখার জন্য সুপারিশ করা হয়। পিসিআর প্লেটগুলি আঠালো অ্যালুমিনিয়াম ফয়েল সিলারগুলি (উচ্চ -} তাপমাত্রা প্রতিরোধী) বা স্ব - আঠালো ফিল্ম (একক -} ব্যবহারের জন্য) ব্যবহার করার পরামর্শ দেওয়া হয়।

হালকা সুরক্ষা: হালকা - সংবেদনশীল উপাদানগুলি (যেমন নির্দিষ্ট রঞ্জক বা প্রাইমার) সমন্বিত রিএজেন্টগুলি অ্যালুমিনিয়াম ফয়েলে আবৃত করা উচিত, বা কালো পিসিআর প্লেটগুলি (কিছু নির্মাতাদের কাছ থেকে উপলব্ধ) ব্যবহার করা উচিত।

Ii। অ্যালিকোটিং কৌশলগুলি: পুনরাবৃত্তি ফ্রিজ থেকে লোকসান হ্রাস করা - চক্র চক্রগুলি

অ্যালিকোটিং রিএজেন্টগুলি পিসিআর প্যাকেজিংয়ের একটি মূল পদক্ষেপ এবং সরাসরি পরীক্ষামূলক পুনরুত্পাদনযোগ্যতার উপর প্রভাব ফেলে।

মাস্টার মিক্স অ্যালিকোটিং: বাণিজ্যিক মাস্টার মিক্সগুলি (যেমন টাক এনজাইম এবং ডিএনটিপি মিক্স) প্রতিক্রিয়া ভলিউমের উপর ভিত্তি করে একটি 5% -} 10% মার্জিন (যেমন, 20 μL প্রতিক্রিয়ার জন্য, অ্যালিকোট 22 μL প্রতি টিউব) এর ভিত্তিতে অ্যালিকোয়েট হওয়ার পরামর্শ দেওয়া হয়। বাল্ক প্যাকেজিং থেকে সরাসরি ব্যবহার করা এড়িয়ে চলুন, যেমন বারবার ফ্রিজ - গলানো চক্রগুলি এনজাইম ক্রিয়াকলাপ হ্রাস করতে পারে (টাক এনজাইম হিম-থা চক্রের জন্য প্রায় 5% ক্রিয়াকলাপ হারাতে পারে)।

প্রাইমার এবং টেমপ্লেটস: প্রাইমারগুলি (বিশেষত কাস্টম প্রাইমার) 100 মিমি স্টক সমাধান থেকে অ্যালিকোয়েট হওয়ার পরামর্শ দেওয়া হয় এবং - 20 ডিগ্রি এ সংরক্ষণ করা হয়। ব্যবহারের আগে একটি কাজের ঘনত্বের (সাধারণত 0.1–1 মিমি) পাতলা করুন। জিনোমিক ডিএনএর মতো টেমপ্লেটগুলি ক্রস-দূষণ এড়াতে একক - পরিমাণ ব্যবহার করতে হবে।

দূষণ প্রতিরোধের টিপস: সেন্ট্রিফিউজ টিউবগুলি অ্যালিকোটিংয়ের আগে শুকনো রয়েছে তা নিশ্চিত করুন (অবশিষ্টাংশ ইথানল পিসিআরকে বাধা দিতে পারে), প্রাক - শীতল রিএজেন্টগুলি প্রাচীরের সাথে লেগে থাকা থেকে রোধ করতে এবং ত্বকের ডিএনএ দূষণ এড়াতে পুরো প্রক্রিয়া জুড়ে গ্লাভস পরিধান করার জন্য শীতল পাইপেট টিপস।

Iii। লেবেলিং এবং রেকর্ডকিপিং: "ব্ল্যাক বক্স" ট্র্যাপটি এড়িয়ে চলুন

পিসিআর প্যাকেজিংয়ের জন্য ক্লিয়ার লেবেলিং গুরুত্বপূর্ণ; ভুল লেবেলিং পুরো পরীক্ষাটি নষ্ট করতে পারে।

বাধ্যতামূলক লেবেলিং তথ্য: রিএজেন্ট নাম (যেমন, "2 × টাক মাস্টারমিক্স"), ঘনত্ব/সামগ্রী (যেমন, "10 মিমি ডিএনটিপিএস"), ব্যাচ নম্বর (ট্রেসেবিলিটিভারের জন্য), স্টোরেজ শর্তাবলী (যেমন, "-20 ডিগ্রি হালকা থেকে সুরক্ষিত"), অ্যালিকোটের তারিখ এবং মেয়াদোত্তীর্ণের তারিখ (যেমন, "6 মাসের মধ্যে ব্যবহার")।

বিশেষ লেবেলিং: যদি রিএজেন্টে গ্লিসারল (অ্যান্টিফ্রিজে), রঞ্জক (যেমন, এসওয়াইবিআর গ্রিন), বা অ্যাডিটিভস (যেমন, বিএসএ) থাকে তবে অতিরিক্ত তথ্য সরবরাহ করতে হবে (যেমন, "50% গ্লিসারল রয়েছে, উচ্চ তাপমাত্রায় সঞ্চয় করবেন না")।

রেকর্ড সিঙ্ক্রোনাইজেশন: প্রতিটি টিউবের সামগ্রীর (যেমন, প্রাইমার সিকোয়েন্স, টিএম মান) এর বিশদ পরামিতিগুলি রেকর্ড করতে এবং শারীরিক লেবেল সংখ্যার সাথে যুক্ত করার জন্য একটি স্প্রেডশিট বা ল্যাবরেটরি ম্যানেজমেন্ট সফ্টওয়্যার (যেমন, ল্যাবগুরু) ব্যবহার করার পরামর্শ দেওয়া হয়।

Iv। স্টোরেজ এবং পরিবহন: ভারসাম্য তাপমাত্রা এবং শারীরিক সুরক্ষা

পিসিআর রিএজেন্টগুলির স্থায়িত্ব স্টোরেজ অবস্থার উপর অত্যন্ত নির্ভরশীল এবং পরিবহণের সময় অতিরিক্ত সুরক্ষা প্রয়োজন।

সাধারণ স্টোরেজ:

এনজাইমস (টিএকিউ, বিপরীত ট্রান্সক্রিপ্টস): দীর্ঘ - টার্ম স্টোরেজ - 20 ডিগ্রি (পুনরাবৃত্ত ফ্রিজ -গলা চক্র এড়িয়ে চলুন; ভবিষ্যতের ব্যবহারের জন্য অ্যালিকোট এবং -80 ডিগ্রি স্টোর);

প্রাইমার/প্রোবস: 1 বছরেরও বেশি সময় ধরে -20 ডিগ্রিতে সঞ্চয় করুন (যদি বায়োটিনের মতো পরিবর্তিত গোষ্ঠী থাকে তবে আলো থেকে রক্ষা করুন);

নন - এনজাইম বাফার (যেমন, পিবিএস): সংক্ষিপ্ত - টার্ম স্টোরেজ 4 ডিগ্রি (1 মাস পর্যন্ত)।

পরিবহণের প্রয়োজনীয়তা:

কোল্ড চেইন পরিবহনের জন্য, এনজাইমগুলির জন্য শুকনো বরফ (- 78 ডিগ্রি) ব্যবহার করুন (-20 ডিগ্রি নীচে রক্ষণাবেক্ষণ করা) এবং স্বল্পমেয়াদী পরিবহনের জন্য বাফারগুলির জন্য নীল বরফ (প্রায় 0 ডিগ্রি) ব্যবহার করুন।

অতিরিক্ত কম্পন এড়িয়ে চলুন (কূপগুলির মধ্যে রিএজেন্টগুলির মিশ্রণ রোধ করতে ফোম বাক্সগুলিতে পিসিআর প্লেটগুলি সুরক্ষিত করা উচিত)।

উচ্চ গ্রীষ্মের তাপমাত্রার সময়, প্যাকেজিংয়ে একটি অন্তরক স্তর যুক্ত করুন (যেমন, অ্যালুমিনিয়াম ফয়েল ইনসুলেশন ব্যাগ + হিমায়িত জেল প্যাক)।

ভি। সাধারণ সমস্যা এবং সমাধান

সমস্যা 1: রিএজেন্ট বৃষ্টিপাত (যেমন, ডিএনটিপিএস বা এমজিসিএল ₂ কম তাপমাত্রায় বৃষ্টিপাত) → সমাধান: সংক্ষিপ্তভাবে সেন্ট্রিফিউজ (1000 আরপিএম, 1 মিনিট) অ্যালিকোটিংয়ের আগে। ব্যবহারের আগে একটি 37 ডিগ্রি ইনকিউবেটারে দ্রবীভূত করুন এবং ভালভাবে মিশ্রিত করতে ঘূর্ণি।

সমস্যা 2: প্লেট সিলার সহজেই খোসা ছাড়িয়ে যায় → সমাধান: আঠালো ব্যাকিং সহ তাপ - প্রতিরোধী সিলার চয়ন করুন, বা একটি তাপ সিলার ব্যবহার করুন (উচ্চ - থ্রুপুট পরীক্ষার জন্য উপযুক্ত)।

সমস্যা 3: অস্পষ্ট লেবেলগুলি → সমাধান: অ্যালকোহল দ্বারা হস্তাক্ষর থেকে মুছে ফেলা রোধ করতে একটি জলরোধী চিহ্নিতকারী (যেমন একটি শার্পি) বা লেজার - প্রিন্ট লেবেলগুলি ব্যবহার করুন।

উপসংহার

পিসিআর প্যাকেজিং কেবল "প্যাকেজিং" রিএজেন্টের চেয়ে বেশি; এটি পরীক্ষামূলক নির্ভরযোগ্যতার জন্য প্রতিরক্ষা প্রথম লাইন। উপযুক্ত উপকরণ নির্বাচন করে, অ্যালিকোটিং প্রক্রিয়াটিকে মানককরণ, পুরোপুরি লেবেলিং বজায় রাখা এবং পরিবহণের সময় কঠোর তাপমাত্রা নিয়ন্ত্রণ বজায় রাখার মাধ্যমে আপনি মানব ত্রুটি উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করতে পারেন, আরও স্থিতিশীল পরবর্তী প্রশস্তকরণ প্রতিক্রিয়া এবং আরও নির্ভরযোগ্য ফলাফল নিশ্চিত করে। মনে রাখবেন: বিশদ সাফল্য নির্ধারণ করুন। যথাযথ পিসিআর প্যাকেজিং অনুশীলনগুলি আপনার পুরো পরীক্ষা জুড়ে উল্লেখযোগ্য সময় সমস্যা সমাধানের সঞ্চয় করতে পারে!